La noche ha caído sobre el Smithsonian de Washington. Los guías se han ido a casa, las luces están apagadas, los escolares están en la cama bien arropados... pero algo increíble empieza a agitarse cuando el antiguo vigilante nocturno Larry Daley (Ben Stiller) se ve atraído a la mayor aventura de cuantas ha vivido, la que dejaría más atónito a cualquiera, en la que la historia cobra realmente vida. En esta segunda entrega de la saga de Noche en el Museo, Larry libra un combate de tan épicas proporciones que sólo podría desarrollarse en los pasillos del museo más grande del mundo. Ahora, Larry debe tratar de salvar a sus antes inanimados amigos de lo que podría ser su última estancia entre las maravillas del Smithsonian, todas las cuales, desde los famosos cuadros que adornan las paredes a las naves cohete de las salas, adquieren de repente ideas propias.
